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粘质沙雷氏菌及其应用

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粘质沙雷氏菌 及其 应用
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1、所 述种子培养基终浓度组成为: 甘露醇120.0g/L, 谷氨酸钠110.0g/L, 酵母膏15.5; 0013 (2)种子培养: 挑取斜面菌体接种至种子培养基, 在30培养24h, 获得种子液; 0.5g/L, 己内酰胺1.0g/L, 琼脂20.0g/L, 溶剂为去 离子水, pH 7.0-7, 酵母膏3.0g/L, K2HPO4 0.75g/L, KH2PO4 0.75g/L, MgSO4 pH 7.0-7.5; 优选斜面培养基终浓度组成为: 甘露醇10.0g/L, 谷氨酸钠7.0g/LgSO4 0.11.0g/L, 己内酰胺0.12.0g/L, 琼脂20.0g/L, 溶剂为去离子水, 酵。

2、母膏15.0g/L, K2HPO4 0.11.0g/L, KH2PO40.1 1.0g/L, M获得斜面菌体; 所述斜面培养基终浓度组成为: 甘露醇1 20.0g/L, 谷氨酸钠110.0g/L,制备: (1)斜面培养: 将粘质沙雷氏菌ZJB-16006接 种至斜面培养基, 在30培养48h, 初始加入终浓度为2-100g/L反应介质, 优选5g/L。 0012 进一步, 所述催化剂按如下方法 进一步, 所述催化剂用量以湿菌体重量计为10-100g/L反应介质, 优选35g/L, 所述 底物基甲基磷酰基)-丁腈)生成L-2-氨 基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸过程如下: 0010 0011-2。

3、-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸。 0009 腈水解酶生物催化 -氨基腈(2-氨基-4(羟乙 在30-50、 100-200rpm条件下进行转化反应, 反应 结束, 将反应液分离纯化, 获得L-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁腈为底物, 以蒸馏水或 100mM、 pH 7.0磷酸缓冲液为反应介质,用, 所述的应用为: 以粘质沙雷氏菌ZJB-16006经发酵培 养获得的湿菌体为催化剂, 以2-氨基基磷酰基)-丁腈)制备作为L-草铵膦重要手性前体的L-2-氨基-4 (羟乙基甲基磷酰基)-丁酸中的应(Serratia marcescens)ZJB-16006催化 -氨 基腈(2-氨基-4(羟乙基甲3日。

4、, 地址: 中国.武汉.武汉大学, 邮编430072。 0008 本发明还涉及所述的粘质沙雷氏菌国典型培养物保藏中心, 保藏编号CCTCC No: M 2017033, 保藏日期2017年01月1酶性能的新菌株-粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)ZJB-16006, 保藏于中甲基磷酰基)-丁酸的应用。 0006 本发明采用的技术方案是: 0007 本发明提供一株具有产腈水解 及其生物催化 -氨基腈底物(2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁 腈)制备L-2-氨基-4(羟乙基一株产腈水解酶的菌株-粘质沙雷氏 菌 (Serratia marcescens)ZJB-16006,工业。

5、化路 线的Srecker法合成L-草铵膦提供了依据。 (三)发明内容 0005 本发明目的是提供)-丁腈)制 备合成L-草铵膦的重要手性前体: L-2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸, 为实现应替换Srecker 路线中的酸解步骤, 催化路线中的 -氨基腈底物(2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基18977 A 3 成、 腈铵化、 酸解、 铵化反应制得D,L-草铵膦。 用腈水解酶选择性催化水解反三乙酯和三氯化磷为起始原料, 经歧化、 格氏、 甲基化、 加 说明书 1/7 页 3 CN 1071ecker法合成D,L-草铵膦路线反应条件温和, 是目前产业化大生 产所采用的路线。 该路线以亚磷酸-草。

6、铵膦; Srecker法合成D,L-草铵膦; 明治制果不对称催化 加氢合成L-草铵膦。 其中Sr用于工业化生产草铵膦的方法可归结为以下三条路线: 拜耳公司利用 Michael自由基加成法制备D,L拆分法、 D-氨基酸氧化酶拆分法等(现代农药, 2009, 8(3): 1-5)。 0004 目前应化法, 谷氨酰胺酶三种酶协同水解法; 转氨酶法; -胰 乳蛋白酶拆分法、 酰胺酶拆分法、 脱乙酰基酶宁进行外消旋体拆分法; 酶法合成L-草铵膦主要有蛋白酶水解法、 磷酸二酯酶I水解法, 酰基转移酶I催酸为手性源的天然氨基酸手性源法、 不对称Strecker反应和不对称 Michael加成法、 利用奎膦:。

7、 D-缬氨酸甲酯和(S)-2-羟基-3-蒎酮为辅助剂的手性辅助剂诱导 法、 L-谷氨酸和L-蛋氨重排法、 Michael自由基加成法、 (Srecker)法合成DL-草铵 膦; 化学法合成L-草铵ucherer-Bergs)法、 赫勒-贝格斯 (Bucherer-Bergs)法、 (Neber)el)丙二酸二乙酯合成法、 阿布佐夫 (Arbuzov)合成法、 高压催化合成法、 赫勒-贝格斯(B 还能减轻环境压力。 草铵膦的合成方法有很多, 包 括化学法合成外消旋草铵膦: 盖布瑞尔(Gabri 市售的草铵膦一般都是外消旋混合物, 如果能以L-型的草铵膦 来代替其使用, 不仅可以降低使用成本,特点。

8、。 草铵膦是外消旋体混合物, 只有L型具有植物毒性, 其除草活性为 外消旋混合物的2倍。 目前,性外还具有杀虫杀菌活性可以与杀虫剂等混配达到同时防治的效果。 该除草剂具有高 效、 低毒、 易降解等国赫斯特 公司(目前为拜耳公司旗下企业)于20世纪80年代开发的新型灭生性除草剂。 除了具有除草 活L-高 丙氨酸(别名: D,L-草铵膦胺盐), 为广谱、 触杀型、 灭生性、 非残留除草剂, 是由德 有效成分是phosphinothricin(简称PPT), 其化学名称为: 4-羟基甲基膦酰基-D003 L-2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸是制备L-草铵膦的重要手性前体。 DL-草铵 膦,el。

9、)的关键中间体R 型邻氯扁桃酸; 制备IDA路线生产除草剂草甘膦的关键中间体亚氨基二乙酸等。 0tin)的关键中间 体(R)-3-羟基戊二酸乙酯; 制备抗血小板聚集药物氯吡格雷(Clopidogr其中间体、 食品及饲料 添加剂等领域得到了广泛应用: 腈水解酶催化制备瑞舒伐他汀(Rosuvasta学合成中表现出巨大的应用潜力, 无 论在应用数量还是种类上都有较大发展, 在医药及其中间体、 农药及强酸强碱, 污染较少, 有着化学方法无可比拟的 优越性, 符合原子经济型和绿色化学的发展方向, 在化羧酸。 其选择性好, 转化率高, 同时, 该途径与传统工 艺相比具有反应条件温和, 无需高温高压、 物具。

10、有独特的化学选择性、 立体选择性和区域选择性, 可以用于合成多 种化学法合成效率低下或难以合成的trilase, EC 3.5.5.1)能将腈类化合物中的氰基直接转化为羧基制 备羧酸, 它对腈化合前体的L-2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰 基)-丁酸的应用。 (二)背景技术 0002 腈水解酶(Ni 及其在生物催化 -氨基腈底物(2-氨基-4(羟 乙基甲基磷酰基)-丁腈)制备作为L-草铵膦重要手性18977 A 2 粘质沙雷氏菌及其应用 (一)技术领域 0001 本发明涉及一株产腈水解酶的菌株, 即得产物L-2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸。 权利要求书 1/1 页 2 CN 1071脱液;。

11、 将洗脱液减压蒸馏至无溶剂流出, 加入甲醇溶解, 在冰浴下搅拌, 重结晶, 过 滤, 滤饼干燥水洗涤, 再用0.52.0M的氨水进行洗脱, 洗脱速度为1.04.0BV/h, 收集含有目标 物的洗.5, 采用阴离子交换树脂2017进行柱层析, 以上柱流速为16.0BV/h进行上样, 先用 去离子.5。 6.如权利要求3所述的应用, 其特征在于所述反应液分离纯化的方法为: 将反应液调至 pH 2 MgSO4 0.11.0g/L, 己内酰胺0.12.0g/L, 溶剂为去离子水, pH 7.0-7, 酵母膏15.0g/L, K2HPO4 0.11.0g/L, KH2PO4 0.1 1.0g/L, 收集。

12、湿菌体; 所述发酵培养基终浓度组成为: 甘露醇1 20.0g/L, 谷氨酸钠110.0g/L接种量接种至发酵培养基中, 30, 150rpm振 荡培养48h后, 在12000g下离心10min2.0g/L, 溶 剂为去离子水, pH 7.0-7.5; (3)发酵培养: 将种子液以体积浓度1的1.0g/L, KH2PO4 0.11.0g/L, MgSO4 0.11.0g/L, 己内酰胺0.1 甘露醇120.0g/L, 谷氨酸钠110.0g/L, 酵母膏15.0g/L, K2HPO4 0.1: 挑取斜面菌体接种至种子培养基, 在30培养24h, 获得种子液; 所述种 子培养基终浓度组成为:0.12。

13、.0g/L, 琼脂20.0g/L, 溶剂为去离子水, pH 7.0-7.5; (2)种子培养0.1 1.0g/L, KH2PO40.11.0g/L, MgSO4 0.11.0g/L, 己内酰胺成为: 甘露醇120.0g/L, 谷氨酸钠110.0g/L, 酵母膏15.0g/L, K2HPO4 菌ZJB-16006接种至斜面培养基, 在30培养48h, 获得斜面菌体; 所述斜面培养 基终浓度组5.如权利要求3所述的应用, 其特征在于所述催化剂按如下方法制备: (1)斜面培养: 将 粘质沙雷氏量以湿菌体重量计为20-100g/L 反应介质, 所述底物初始加入终浓度为2-10g/L反应介质。 得L-2。

14、-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸。 4.如权利要求3所述的应用, 其特征在于所述催化剂用质, 在30-50、 100-200rpm条件下进行转化反应, 反 应结束, 将反应液分离纯化, 获氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁腈为底物, 以蒸馏水 或100mM、 pH 7.0磷酸缓冲液为反应介其特征在于所述的应用为: 以粘质沙雷氏菌ZJB-16006经 发酵培养获得的湿菌体为催化剂, 以2-基)-丁腈)制备L-2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸中的应用。 3.如权利要求2所述的应用, 2.一种权利要求1所述粘质沙雷氏菌ZJB-16006在催化 -氨基腈(2-氨基-4(羟乙基甲 基磷酰1703。

15、3, 保藏日期2017年01月13日, 地址: 中国, 武汉, 武汉大学, 430072。 ens)ZJB-16006, 保藏于中国典型培养物保藏中 心, 保藏编号CCTCC No: M 20017.09.01 CN 107118977 A 1.粘质沙雷氏菌(Serratia marcesc有重要应用前景。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图2页 CN 107118977 A 2基)-丁腈制得作为L-草铵膦重 要手性前体的L-2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)- 丁酸的方法, 具粘质沙雷氏菌ZJB-16006经发酵 培养获得的湿菌体为生物催化剂催化2-氨基-4 (羟乙基甲基磷酰株-粘质。

16、沙 雷氏菌(Serratiamarcescens)ZJB-16006, 本发 明还提供了利用性前体的L-2-氨 基-4(羟乙基甲基磷酰基)-丁酸中的应用, 本发 明提供了一株能够产腈水解酶的菌质沙雷氏菌及其催化 -氨基腈底物(2-氨基-4(羟乙基甲基磷酰基)- 丁腈)制备作为L-草铵膦重要手1/43(2006.01) (54)发明名称 粘质沙雷氏菌及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种粘t.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 13/04(2006.01) C12R (74)专利代理机构 杭州天正专利事务所有限公 司 33201 代理人 黄美娟李世玉 (51)In址 310014 浙江省杭州市下城区潮王路 18号 (72)发明人 薛亚平郑裕国吕胜芝徐建妙 柳志强信息 CCTCC No: M 2017033 2017.01.13 (71)申请人 浙江工业大学 地(21)申请号 201710207986.3 (22)申请日 2017.03.31 (83)生物保藏(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日。

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本文标题:粘质沙雷氏菌及其应用
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